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品牌:赛默飞世尔科技(Thermo Fisher Scientific),全球科学服务领域的领导者。
产地:美国原装进口。核心研发与制造基地位于美国俄勒冈州尤金市(Eugene, Oregon)。在中国市场,由赛默飞世尔科技(中国)有限公司负责销售、技术支持及售后保障。
Attune NxT 是一款声波聚焦流式细胞仪。其核心功能是对悬浮在液体中的单个细胞或微粒进行高速、多参数的定量分析和分选(仅限分选型号)。它通过激光照射单行排列的细胞,检测细胞产生的散射光(反映细胞大小、复杂度)和荧光信号(反映细胞表面或内部蛋白、核酸表达),从而实现对复杂细胞群体(如血液、组织消化液)的精确计数、表型鉴定(如T细胞亚群分析)、功能状态评估(如细胞凋亡、钙流)以及特定细胞群体的物理分离(分选)。
声波聚焦技术(Acoustic Focusing):这是Attune NxT区别于传统流式细胞仪的核心技术。它利用超声波在流动室内产生驻波,将细胞精准地“推”到液流的中心轴线上排列成单行。相比传统的水动力聚焦(依赖高鞘液压力),声波聚焦在极低样本压力(低至3.5 psi)下即可实现高通量分析(达35,000 events/s),且对细胞形态无损伤,特别适合处理脆弱细胞(如原代细胞、血小板)和超大样本量。
免微珠自动校准(Autocalibration):系统内置算法,使用标准荧光微球即可自动完成所有激光器(蓝、紫、红、黄)的光路对准(PMT电压优化),无需人工繁琐调节补偿或电压。开机后5分钟内即可进入待测状态,极大降低了操作门槛和人为误差。
四激光十四色配置:标准配置通常包含蓝光(488nm)、紫光(405nm)、红光(640nm)和黄绿光(561nm)四根固态激光器,最多可同时检测14个荧光参数。其光学设计采用非正交空间分离,有效减少了荧光串扰,提高了弱信号检测的灵敏度。
Attune NxT Software 软件:提供直观的采集模板(Acquisition Templates)和自动设门(Automated Gating)功能,支持从入门级“一键式”操作到高级自定义实验的全面需求。
免疫学与临床前研究:免疫细胞分型(如CD4+/CD8+ T细胞计数)、细胞因子检测、免疫检查点(如PD-1/PD-L1)表达分析。
细胞生物学:细胞周期与凋亡检测、胞内信号传导(磷酸化流式)、干细胞鉴定。
微生物学:细菌计数与活力分析(替代传统平板计数法)、微生物群落多样性研究。
血液学:网织红细胞计数、血小板功能分析、微小残留病灶(MRD)检测。
分选应用(Attune NxT分选型):稀有细胞(如循环肿瘤细胞CTCs)分选、单细胞分选用于单细胞测序建库。
https://assets.thermofisher.com/TFS-Assets/BID/images/attune-nxt-flow-cytometer-angled-800x800.jpg
(图示:赛默飞Attune NxT流式细胞仪,外观为白色主机,正面有液晶触摸屏,右侧为样本台和废液桶)
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参数类别 |
详细指标(以主流配置Attune NxT 4激光14色分析型为例) |
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激光器配置 |
标配:蓝光(488nm, 50mW)、紫光(405nm, 100mW)、红光(640nm, 80mW)、黄绿光(561nm, 50mW) |
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荧光检测通道 |
14色:FSC, SSC, VL1-VL10 (紫激光), BL1-BL5 (蓝激光), YL1-YL3 (黄激光), RL1-RL3 (红激光) |
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检测灵敏度 |
FITC(荧光素):< 50 MESF(分子等效可溶性荧光素);PE(藻红蛋白):< 20 MESF |
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分析速度 |
35,000 events/秒(声波聚焦模式);低速模式(保护脆弱细胞):< 1,000 events/秒 |
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样本进样方式 |
双进样系统:自动进样器(Autosampler, AS) 支持96孔板/384孔板;管架(Tube Holder) 支持流式管 |
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样本体积 |
最小样本体积:20 μL(适合珍贵样本);最大样本体积:5 mL(管架) |
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分选功能(选配) |
分选型号支持2路或4路分选,分选纯度>98%,回收率>80%,分选速度约10,000 events/s |
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液流系统 |
声波辅助水动力聚焦,鞘液压力可调(3.5 psi - 70 psi) |
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软件系统 |
Attune NxT Software(基于Windows 10),支持自动补偿、批量导出FCS文件 |
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尺寸与重量 |
主机:约 76cm (W) x 66cm (D) x 56cm (H);重量:约 68 kg |
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电源与环境 |
100-240 VAC, 50/60 Hz;操作温度:15°C - 30°C;湿度:<80% RH |
激光安全:设备运行时,严禁打开机盖直视激光光路。维护光路或清洁流动室时,必须先关闭激光器电源,并佩戴激光防护眼镜。
鞘液与废液管理:必须使用无颗粒、无菌过滤的PBS或专用鞘液。严禁使用自来水或含钙镁离子的缓冲液,以防堵塞喷嘴或结晶损伤声波器件。废液桶必须每日清空,并加入适量消毒剂(如次氯酸钠),防止生物气溶胶污染。
样本预处理:上机前样本必须经过300-400目滤膜过滤,以去除细胞团块和杂质。未过滤的样本会瞬间堵塞70μm或100μm的喷嘴,导致仪器报警停机。
关机流程:每日实验结束后,必须执行“Shutdown”程序,用去离子水或清洗液冲洗管路至少10分钟,然后执行“Standby”模式(低速流鞘液),严禁直接断电,否则残留的盐分会在喷嘴内干燥结晶,造成永久性堵塞。
型号选择:分析型 vs 分选型
Attune NxT 分析型:适用于99%的科研实验室和临床检验科室。如果你只需要对细胞进行计数、表型分析(如做免疫分型、凋亡),不需要把特定细胞“抓出来”做后续培养或测序,选择分析型即可。它价格更低,维护更简单。
Attune NxT 分选型:仅适用于需要分离特定细胞群体的用户,如做单细胞克隆、循环肿瘤细胞(CTC)富集、或免疫细胞分选后过继治疗。分选型价格是分析型的1.5-2倍,且需要专门的生物安全柜和分选收集装置。
激光配置策略
基础双激光(蓝+紫):适合预算有限的教学实验室或只做常规免疫表型(CD3/CD4/CD8)的用户。但无法检测DAPI(需紫激光)或APC-Cy7(需红激光),扩展性差。
推荐四激光(蓝+紫+红+黄):强烈建议科研用户选择此配置。黄激光(561nm)对PE(藻红蛋白)的激发效率远高于蓝激光,能显著提升PE通道的灵敏度;红激光(640nm)是检测APC、Cy7等远红外染料所必需的。四激光配置确保了未来5-10年内实验panel升级的冗余度。
应用场景匹配
高通量筛选(HTS):必须选配自动进样器(Autosampler),支持96孔板连续检测,否则手工换管会累死人。
微生物或纳米颗粒分析:需确认配置了高灵敏度前向角散射(FSC)检测器(选配),因为细菌和病毒颗粒的散射光信号极弱。
Attune NxT 属于中高端流式细胞仪,价格根据激光数量和是否分选差异巨大。根据2024-2025年中国市场行情(人民币):
入门级(Attune NxT 双激光分析型,无自动进样):约 80万元 - 100万元。
主流级(Attune NxT 四激光14色分析型,带自动进样器):约 150万元 - 180万元。这是大学实验室和生物公司最常见的配置。
高端分选型(Attune NxT 四激光分选型):约 250万元 - 300万元。
耗材成本:专用鞘液(5L装)约500-800元/桶;70μm喷嘴(消耗品)约3000-5000元/个(寿命约6-12个月);清洗液/去垢剂套件约2000元/套。
标准保修:整机保修1年。保修范围包括激光器、探测器、主板及核心流体模块。注意:因使用不当导致的喷嘴堵塞破裂、样本倒灌损坏流动室,属于人为损坏,不在保修范围内。
服务响应:赛默飞在中国主要城市设有直属的现场服务工程师(FSE)。标准服务级别协议(SLA)为:电话支持4小时响应,现场维修(一线城市)48小时内抵达。
预防性维护(PM):强烈建议购买年度全包服务合同(Care Plan),价格约为设备总价的10%-15%。包含每年2次上门保养(清洁光路、校准性能、更换老化部件)、不限次数的远程诊断、以及优先备件供应。
应用支持:赛默飞提供免费的流式实验设计咨询和上机培训(通常在新机安装后提供1-2天现场培训)。
https://assets.thermofisher.com/TFS-Assets/BID/manuals/attune-nxt-quick-reference-guide.pdf
(图示:Attune NxT 快速参考指南封面截图,包含开机、采集、关机三步法图示)
电子版获取:所有完整版用户手册(User Manual)、维护指南(Maintenance Guide)可在赛默飞官网“Product Manuals”页面输入产品型号“Attune NxT”下载。