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罗氏LightCycler 480 II 384孔荧光定量PCR仪由瑞士罗氏诊断公司(Roche Diagnostics)研发生产。该仪器属于德国原装进口的高端精密设备,其核心部件(如银质热模块、光学棱镜系统)在德国曼海姆工厂制造,代表了罗氏在分子诊断和生命科学研究领域的工艺水准。作为罗氏LightCycler系列的第二代旗舰产品,它继承了该系列在临床验证和科研稳定性方面的深厚基因。
该仪器的核心功能是实现高通量、高精度的实时荧光定量PCR(qPCR)检测。具体包括:1)绝对定量与相对定量:通过标准曲线法或ΔΔCt法精确计算DNA/RNA的起始拷贝数,动态范围高达11个数量级;2)高分辨率熔解曲线(HRM)分析:无需探针即可进行基因分型、突变扫描和SNP检测,分辨率可达0.01℃;3)多重PCR检测:利用其6个独立光学通道,可在单孔内同时检测多达6种不同的靶标(如FAM、VIC、CY5等染料);4)终点法基因分型:适用于TaqMan探针或杂交探针的终点读取。
Therma-Base?热循环技术:采用一体成型的纯银加热模块,结合的气液平衡导热层,彻底消除了传统PCR仪的“边缘效应”,确保384个孔在任意时间点的温度均一性达到±0.1℃,这是获得高重复性数据(CV<0.3%)的物理基础。
全固定光路与冷CCD检测:采用高强度白色LED固态光源(寿命>10,000小时)和五棱镜长光路设计,无需移动任何机械部件即可同时激发并采集整板所有孔的信号,消除了孔间时间差。检测器采用制冷型CCD(工作温度≤10℃),有效降低光子噪声,无需依赖ROX被动参比染料进行孔间校正。
极速升降温:模块最大升温速度可达6.8℃/秒,样本平均升温速度达4.8℃/秒,使得完成40个循环的384孔PCR反应时间缩短至40分钟以内,大幅提升筛选效率。
模块化互换:用户可在5分钟内自行更换96孔或384孔热模块,无需工程师校准,且软件自动识别模块类型,实现了通量的灵活切换。
该仪器主要应用于对数据准确性和通量有极高要求的场景:1)药物研发与生物制药:细胞系开发中的基因表达分析、病毒载体滴度测定(如AAV、慢病毒)、工艺验证中的残留DNA检测;2)临床前研究与转化医学:大规模生物标志物筛选、伴随诊断开发、液体活检中的ctDNA定量;3)基础科研:基因表达谱分析、MicroRNA研究、DNA甲基化分析、病原体高通量筛查;4)农业与食品安全:转基因成分定量、食源性致病菌快速检测。
(此处应插入罗氏LightCycler 480 II 384孔仪器的正面外观图,特征为:银灰色金属机身,正面中央有一个带双向箭头的圆形按钮用于进板,右侧通常连接一台工业级电脑显示器,仪器侧面贴有“LightCycler 480 II”型号标签。)
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参数类别 |
详细指标 |
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型号名称 |
LightCycler 480 Instrument II (384-well) |
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样品通量 |
384孔(兼容96孔模块,需另购) |
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反应体积 |
384孔板:3 μL - 20 μL;96孔板:10 μL - 100 μL |
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温控系统 |
Peltier半导体温控,银质模块 |
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温度范围 |
37℃ - 99℃ |
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温度准确性 |
≤ ±0.1℃ (37-99℃) |
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温度均一性 |
≤ ±0.1℃ (任意时间点) |
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升温速度 |
模块最大:≥6.8 ℃/s;样本平均:≥4.8 ℃/s |
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降温速度 |
模块最大:≥4.4 ℃/s |
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光学系统 |
高强度白色LED固态光源,冷CCD检测器 |
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激发波长 |
390-710 nm(连续光谱),5个激发滤光片 |
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检测通道 |
6个独立检测通道(可自由组合达20种模式) |
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检测模式 |
SYBR Green I, TaqMan, Hybridization Probe, SimpleProbe, FRET |
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HRM分辨率 |
≤ 0.01℃ |
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动态范围 |
11个数量级(1 - 10^10 copies) |
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运行时间 |
40个循环(384孔)< 40分钟 |
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数据采集 |
全板同时采集,无孔间时间差 |
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软件平台 |
LightCycler 480 Software (Version 1.5或更高) |
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物理尺寸 |
约 60 cm (W) × 60 cm (D) × 54.5 cm (H) |
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重量 |
约 55 kg |
耗材兼容性:必须使用罗氏原厂或认证的无裙边/半裙边矮板(如Roche Cat# 04729749001)。严禁使用高裙边板或厚底板,否则会卡住机械臂或导致光学焦距不准。
封膜要求:必须使用光学级透明封板膜(如Roche LightCycler 480 Sealing Foil),且封膜时需确保无褶皱、无气泡。裸手或戴粉状手套接触膜面会导致荧光淬灭或背景升高。
环境温度:仪器工作环境需维持在15℃ - 32℃,湿度20%-80%。环境温度过高会导致Peltier冷却效率下降,仪器报错“Over Temperature”。
清洁维护:定期用无水乙醇擦拭进板轨道和模块表面。严禁使用强腐蚀性溶剂(如次氯酸钠)直接冲洗模块,会导致银质表面腐蚀和热电偶损坏。
软件合规:若用于GLP/GMP环境,需购买并激活“21 CFR Part 11”合规软件模块,否则默认研究版软件不具备完整的审计追踪(Audit Trail)功能。
适用场景决策:
必选场景:实验室日均样本量超过500个,且需要进行HRM分析或复杂多重检测(如5-6色)。LightCycler 480 II的温控均一性是HRM数据的“金标准”。
慎选场景:如果实验室主要做简单的SYBR Green表达量检测,且样本量少(<96孔/天),建议购买LightCycler 96或更经济的品牌,因为480 II的耗材(384孔板)成本和维护成本较高。
升级建议:若已拥有老款LightCycler 480(I代),升级至II代主要获益于白色LED光源(免维护)和更快的运行速度,对于通量瓶颈实验室是值得的。
配置选择:基础套餐通常包含384孔模块。如果实验室同时有低通量摸索实验,强烈建议加购96孔模块(货号:05015243001),实现“一机两用”。对于自动化流水线用户,需确认是否选配“Automation Kit”以兼容机械臂。
罗氏LightCycler 480 II属于高端定价策略,全新机市场参考价格区间为人民币80万元至150万元。
基础版(约80万-100万):仅包含384孔模块、基础软件和研究版授权。
全配版(约120万-150万):包含96孔+384孔双模块、21 CFR Part 11合规软件、自动化接口套件、以及首年白金服务合同。
影响因素:价格受汇率、关税、代理商层级(一级代理 vs 二级)影响大。政府采购或高校集采通常能拿到较低折扣。二手市场(8-10年机龄)价格约为20万-40万,但需警惕光源衰减(>15000小时)和模块老化风险。
保修政策:全新机标准整机保修期为1年。保修范围涵盖所有硬件故障(包括光源、CCD、主板、热模块)。注意:软件Bug修复和技术支持电话通常终身免费,但硬件过保后维修费用极高(如更换热模块约10万-15万元)。
服务合同(Service Contract):强烈建议购买年度预防性维护(PM)合同。罗氏提供银牌(每年1次上门PM)、(每年2次PM+4小时响应)等级别。年费约为设备购置价的8%-12%。合同期内提供免费校准、性能认证(IQ/OQ/PQ)和备件优先更换。
技术支持:提供7x24小时热线支持。罗氏拥有专门的qPCR应用科学家团队,可提供免费的上机培训(通常在新机安装时)和定期的高级应用讲座(如HRM实验设计)。
(此处应附上《LightCycler 480 Operator's Manual》或《Quick Start Guide》的封面截图。该说明书通常为PDF格式,超过200页,包含详细的硬件介绍、软件操作流程图、故障代码查询表以及维护日程表。关键章节包括:“Loading the Sample Plate”、“Creating a New Protocol”、“Analysis of Melting Curves”。)